人胰島素受體底物1(IRS1) ELISA 試劑盒
實(shí)驗(yàn)原理
1. 抗體或抗原的吸附：將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。
2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。
3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí)，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度，可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。
試劑盒性能
1. 檢測(cè)范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。
2. 靈敏度：檢測(cè)濃度小于0.78 nmol/L。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15%。
試劑盒組成
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無(wú) |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5mL | 0.5mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
樣本xishi液 | 6mL | 3mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
檢測(cè)抗體-HRP | 6mL | 3mL | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液 | 20mL | 20mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
底物 B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無(wú) |
說(shuō)明書 | 1 份 | 1 份 | 無(wú) |
自封袋 | 1 個(gè) | 1 個(gè) | 無(wú) |
操作步驟
1. 樣品采集與處理
（1）血清：收集血液后，室溫放置30分鐘左右，待血液凝固后離心分離血清。
（2）血漿：收集血液后，加入適量抗凝劑（如EDTA），離心分離血漿。
（3）細(xì)胞培養(yǎng)上清液：收集細(xì)胞培養(yǎng)液，離心去除細(xì)胞殘骸，收集上清液。
2. 樣品稀釋
根據(jù)需要，將血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。
3. 加樣與溫育
（1）將稀釋后的樣品加入已包被兔生長(zhǎng)抑su抗體的酶標(biāo)板孔中，每孔加入100μL。
（2）加入適量酶標(biāo)二抗，每孔加入100μL。
（3）將酶標(biāo)板放入37℃恒溫箱中溫育30分鐘。
4. 洗板與顯色
（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液洗3次，每次5分鐘。
（2）加入底物液，每孔加入100μL，放入37℃恒溫箱中溫育15分鐘。
（3）加入終止液，每孔加入50μL，混勻。
5. 測(cè)定與結(jié)果計(jì)算
（1）用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔的光密度值（OD值），波長(zhǎng)為450nm。
（2）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與OD值的對(duì)應(yīng)關(guān)系，計(jì)算出樣品中兔生長(zhǎng)抑su濃度。
人胰島素受體底物1(IRS1) ELISA 試劑盒結(jié)果分析
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出樣本中角蛋白1（KRT1）的濃度。具體分析方法可參考試劑盒說(shuō)明書或相關(guān)文獻(xiàn)。
注意事項(xiàng)
A 仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。
B 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過(guò)有效期，請(qǐng)勿使用。
C 按說(shuō)明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）。
D 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。
E 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，（比如移液器，試管，清洗器，酶標(biāo)儀）。
F 按說(shuō)明書將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
G 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書推薦的條件存儲(chǔ)。
H 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測(cè)稀釋液，可能在設(shè)計(jì)時(shí)就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標(biāo)板之，必需不停攪拌。
I 充分的孵育時(shí)間和溫度。
J 切勿使用不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。
K 在混合或溶解蛋白溶液時(shí)，避免泡沫產(chǎn)生。
L 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之，安排好實(shí)驗(yàn)流程。
M 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之，清潔工作臺(tái)。
N 若有問(wèn)題，應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系。
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